title ru

Архив журнала > 2014 > № 3, май-июнь

РОЛЬ Т-ДОМЕНА ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА
ВО ВНУТРИКЛЕТОЧНОМ ТРАНСПОРТЕ
ТОКСИНСОДЕРЖАЩИХ ВЕЗИКУЛ
А. Ю. Лабынцев, Д. В. Колибо, Е. С. Юрченко, А. А. Кабернюк,
Н. В. Короткевич, С. В. Комисаренко
 
Институт биохимии им. А. В. Палладина НАН Украины, Киев;
е-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Субъединица В дифтерийного токсина (ДТ), которая состоит из двух доменов, R – рецепторного и Т – трансмембранного, играет важную роль в связывании токсина с рецептором на клетках-мишенях и в транспорте каталитической субъединицы А в цитозоль. Рекомбинантные аналоги субъединицы В являются перспективными представителями уникального класса транспортных протеинов, которые способны обеспечить доставку биологически активных молекул в цитозоль клеток. Создание таких конструкций требует определения роли каждого из фрагментов ДТ в транспортировании поглощенного комплекса рецептор–токсин. В работе исследовали роль Т-домена во внутриклеточном транспорте рекомбинантных фрагментов ДТ. Для этого сравнивали особенности внутриклеточного транспортирования R-домена и субъединицы В, которая содержала как R-, так и Т-домен ДТ. Рекомбинантные фрагменты ДТ метили флуоресцентными протеинами, что позволило использовать в исследовании технику колокализации. Методом конфокальной микроскопии показаны отличия в транспортировании рекомбинантных производных ДТ в клетках линии Vero. Показано, что R-домен быстрее, чем субъединица В, попадает в тубулярные компартменты клетки. Анализ колокализации R-домена и субъединицы В подтверждает почти линейный ее рост согласно с коэффициен­том Пирсона (PCC) при увеличении времени инкубации. Однако процент субъединицы В, которая колокализирована с R-доменом, определенный по коэффициенту Мандерса (M1), рос нелинейно, что может свидетельствовать о способности субъединицы В попадать в определенные компартменты клетки, недоступные для R-домена. Роль Т-домена во внутриклеточном транспорте и компартментализации токсина, вероятно, связана с его способностью к формированию протонных каналов и взаимодействию с комплексом протеинов цитоплазмы COPI.

Ключевые слова: дифтерийный токсин, Т-домен дифтерийного токсина, эндоцитоз, флуоресцентные протеины, конфокальная микроскопия, внутриклеточный транспорт.

Оригинал статьи на английском языке доступен для скачивания в формате PDF.

© Украинский биохимический журнал