Архив журнала > 2009 > № 1, январь-февраль

ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ СУБЪЕДИНИЦЫ
В ДИФТЕРИЙНОГО ТОКСИНА И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ИХ
С КЛЕТКАМИ ЛИНИИ VERO
 
А. А. Кабернюк, А. Ю. Лабынцев, Д. В. Колибо, О. С. Олейник, Т. А.?Редчук,
Н. В. Короткевич, В. Ф. Горчев, С. О. Карахим, С. В. Комисаренко
 
Институт биохимии им. А. В.?Палладина НАН Украины, Киев;
e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

В-субъединица дифтерийного токсина обеспечивает взаимодействие токсина с рецепторами клеток-мишеней и транслокацию субъединицы А с эндосомального компарт­мента в цитозоль  чувствительных клеток. Флуоресцентно-меченые функциональные аналоги субъединицы В дифтерийного токсина являются перспективными инструментами для исследования этих процессов. Целью работы было получение флуоресцентных производных рекомбинантной субъединицы В дифтерийного токсина и определение их свойства специфически взаимодействовать с поверхностью клеток линии Vero. Такие производные были получены двумя методами: путем конъюгирования с изотиоцианатом флуоресцеину и путем создания химерного полипептида субъединицы В с зеленым флуоресцентным протеином EGFP. Методами цитофлуориметрии и конфокальной микроскопии была показана специфичность взаимодействия меченых призводных субъединицы В дифтерийного токсина с клетками линии Vero. С помощью конкурентного анализа было определено, что флуоресцентные производные имеют разное сродство к клеткам, причем ЕGFP-SbB имеет большее сродство, чем FITC-SbB. Результаты демонстрируют возможность использования полученных флуоресцентных зондов для определения экспрессии рецепторов дифтерийного токсина HB-EGF на клетках, а также для изучения особенностей взаимодействия токсина с рецепторами клеток-мишеней.

Ключевые слова: дифтерийный токсин, рекомбинантная субъединица В дифтерийного токсина, зеленый флуоресцентный протеин HB-EGF, флуоресцентные производные дифтерийного токсина, флуоресцентные зонды, взаимодействие дифтерийного токсина с рецептором.

Оригинал статьи на украинском языке доступен для скачивания в формате PDF.

© Украинский биохимический журнал