title ru

Архив журнала > 2007 > № 2, март-апрель

ЭОЗИН Y-ЧУВСТВИТЕЛЬНАЯ АТР-АЗНАЯ АКТИВНОСТЬ
СПЕРМАТОЗОИДОВ МУЖЧИН КАК БИОХИМИЧЕСКИЙ ТЕСТ
НА ОЛИГОЗООСПЕРМИЮ

Н. С. Кочешкова, З. Д. Воробец

Львовский национальный медицинский университет им. Данила Галицкого, Украина;
e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

На препаратах сперматозоидов мужчин репродуктивного возраста (27–44 лет), исследовали чувствительную к ингибирующему действию эозина Y АТР-азную активность в норме и при олигозооспермии, в условиях обработки клеточной суспензии различными детергентами. Разработаны методические подходы тестирования так называемой “общей” и эозин Y-чувствительной АТР-гидролазной активности сперматозоидов. С помощью метода лазерно-корреляционной спектроскопии подобран оптимальный детергент для пермеа­билизации спермальных мембран – сапонин. Сапонин эффективно перфорирует мембраны сперматозоидов, уменьшая их средний гидродинамический диаметр с 10–15 мкм (целые сперматозоиды) до 3–8 мкм при обработке суспензии клеток 0,05%-ым раствором детергента, и до 2–3 мкм при использовании 0,5%-го раст­вора. Неспецифический ингибитор АТР-гидролазных систем эозин Y эффективно снижает АТР-азную активность интактных сперматозоидов практически на 40%. Эффект эозина зависит от состава инкубационной среды. При использовании среды инкубации с катионным составом, характерным для внешнеклеточных условий (оптимальная концентрация сапонина 0,05%) эозин Y-чувствительная АТР-азная активность в сперматозоидах в норме и в условиях олигозооспермии увеличивается в среднем на 220–240%. При проведении ферментативной реакции во внутриклеточных условиях (оптимальная концентрация сапонина – 0,5%) обнаружено увеличение АТР-гидролазной активности в норме до 350–400%, а при наличии олигозооспермии – всего до 130–150%. Эта особенность может быть использована в каче­стве простого и доступного лабораторного теста на развитие данной патологии мужской репродуктивной системы. Эозин Y дозозависимо и эффективно ингибирует “латентную” АТР-азную активность сперматозоидов как в норме, так и при наличии исследуемой патологии. В обоих случаях при линеаризации кривых каталитического титрования АТР-азной активности эозином Y в координатах Хилла обнаружена двухфазная зависимость – высокой и низкой афинности (средние значения кажущихся констант ингибирования І0,5 составляют 0,1 и 0,3–0,4 мМ соответственно). При этом как в норме, так и при олигозооспермии для высокоафинной компоненты характерна позитивная кооперативность, а для низкоафинной?– негативная (тестировалось по величине коэффициента Хилла nH). Полученные данные имеют фундаментальное и практическое значение для дальнейшего изучения мембранных механизмов, участвующих в поддержании ионного гомеостаза сперматозоидов человека и его нарушений при развитии различных патологий, а также служит теоретической основой для усовершенствования лабораторных биохимических методов, направленных на тестирование такой патологии как олигозооспермия.

Ключевые слова: сперматозоиды, олигозооспермия, АТР-азная активность, лазерно-корреляционная спектроскопия, сапонин, эозин Y.

Оригинал статьи на украинском языке доступен для скачивания в формате PDF.

© Украинский биохимический журнал