title ru

Архив журнала > 2006 > № 5, сентябрь-октябрь

?-N-АЦЕТИЛГАЛАКТОЗАМИНИДАЗА Aspergillus niger:
ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И СВОЙСТВА

Н. В. Борзова, Л. Д. Варбанец

Институт микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного НАН Украины, Киев;
e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Из культуральной жидкости микромицета Aspergillus niger выделена ?-N-ацетилгалактозаминидаза, очищенная в 600 раз осаждением сульфатом аммония, а также ионообменной и гель-хроматографией на ТSК-гелях. Удельная активность фермента составляет 10,5 Е/мг белка. Препарат гомогенный, по данным гель-фильтрации на сефарозе 6В его молекулярная масса составляет 430 кДa, Ds-Na-ПААГ – 70 кДа, что дает основание предположить олигомерное строение молекулы фермента, в которой присутствует углеводный компонент, представленный маннозой, галактозой, глюкозамином и двумя неидентифицированными гексозаминами. Термо- и рН-оптимумы фермента составляют 60 °С, рН 3,5, он термо- и рН-стабилен, устойчив при хранении, проявляет узкую специфичность по отношению к гликону. Показано, что ?-N-ацетилгалактозаминидаза конкурентно ингибируется субстратом и продуктом реакции. Установлено, что Кm и Vmax для нитрофенильного субстрата составляют 1,25 мМ и 10,5 мкмоль/мин/мг белка соответственно. Изученная гликозидаза является металлонезависимым ферментом. В активном центре молекулы фермента установлено присутствие карбоксильной группы С-концевой аминокислоты и имидазольной группы гистидина. Показано, что ряд природных и синтетических веществ (сухая бычья кровь, гуанидин карбонат, нитроаминогуанизон салицилового альдегида и диметиламинобензальдегид) способен оказывать активирующий эффект (увеличение на 50–200%) на секрецию ?-N-ацетилгалактозаминидазы культурой A. niger.

Ключевые слова: ?-N-ацетилгалактозаминидаза, Aspergillus niger, очистка, физико-химические свойства, каталитическая активность, активный центр фермента.

Оригинал статьи на русском языке доступен для скачивания в формате PDF.

© Украинский биохимический журнал