Архив журнала > 2006 > № 4, июль-август
ИММОБИЛИЗАЦИЯ ОДНОЦЕПОЧЕЧНЫХ АНТИТЕЛ МЫШИ
ДЛЯ АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ
ЦЕЛЛЮЛОЗО-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА
П. В. Гильчук1, Г. Л. Волков2
Описан предложенный авторами лабораторный метод получения аффинного иммуносорбента для хроматографической очистки рекомбинантного интерферона ?2b человека (IFN-?2b), который основан на ориентированной и нековалентной иммобилизации рекомбинантных фрагментов антител на целлюлозном носителе. На основе ДНК последовательностей одноцепочечных антител (ScFv) против IFN-?2b человека и целлюлозосвязывающего домена (CBD) из целлюлозолитического комплекса Clostridium thermocellum сконструирован гибридный белок ScFv-CBD. После экспрессии ScFv-CBD в Escherichia coli и выделения целевого белка в функционально активной форме была проведена его биоаффинная иммобилизация на разных типах целлюлозных носителей. Кристаллическая микрогранулированная целлюлоза с иммобилизированным ScFv-CBD использована как аффинный иммуносорбент для очистки рекомбинантного IFN-?2b человека непосредственно из осветленного лизата клеток E. coli.
Ключевые слова: одноцепочечные антитела, иммуноаффинная хроматография, иммобилизация белка, гибридный белок.
Оригинал статьи на английском языке доступен для скачивания в формате PDF.
© Украинский биохимический журнал