Aрхив журнала > 2006 > №2, март-апрель

ПОЛУЧЕНИЕ СЛИТНОГО БЕЛКА ScFv-CBD И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
ДЛЯ АФФИННОЙ ОЧИСТКИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА ?2b ЧЕЛОВЕКА

П. В. Гильчук1, О. В. Окунев2, М. В. Павлова1, Д. М. Иродов2, О. Б. Горбатюк1

1Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Украина;
2Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев;
e-mail:Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

На основе ДНК-последовательностей одноцепочного антитела (ScFv) против интерферона ?2b человека (IFN-?2b) и целлюлозосвязывающего домена (CBD) из целлюлозолитического комплекса Clostridium thermocellum сконструирован ген слитного белка ScFv-CBD. С использованием высокоэффективной системы экспрессии осуществлен биосинтез ScFv-CBD в клетках Escherichia coli и показано его накопление в нерастворимой форме – тельцах включения. Целевой белок был очищен, выделен в растворимом состоянии и иммобиллизован методом биоаффинного связывания с целлюлозным носителем. В работе проведено сравнительное изучение эффективности различных методов ренатурации белков и возможность их использования для препаративного выделения ScFv-CBD в биологически активной форме. На примере хроматографической очистки рекомбинантного IFN-?2b человека продемонстрирована возможность получения на основе биологически иммобилизованных молекул ScFv иммуноаффинного сорбента.

Ключевые слова: одноцепочечные антитела, целлюлозосвязывающий домен, слитные белки, бактериальные тельца включения, ренатурация белка, иммобилизация белка, аффинная очистка.

Получено: 2006-03-07
Опубликовано на сайте: 2006-09-14

Оригинал статьи на украинском языке доступен для скачивания в формате PDF.

 © Украинский биохимический журнал