Архив журнала > 2006 > № 1, январь-февраль

ИССЛЕДОВАНИЕ ВТОРИЧНОЙ СТРУКТУРЫ И СВОЙСТВ ?- И ?-ФОРМ ТРОМБИНА ЧЕЛОВЕКА

Л. П. Швачко, С. В. Литвинович, В. К. Кибирев

Институт биоорганической химии и нефтехимии НАН Украины, Киев;
e-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.

Методами дифференциальной сканирующей микрокалориметрии (ДСМ) и кругового дихроизма (КД) исследована вторичная структура и свойства ?-тромбина человека и его ?-формы, образующейся при автолизе нативного фермента. По данным ДСМ в препаратах ?-тромбина и ?-формы тромбина наблюдается по одному пику температурного перехода при 58,5 и 53,3 °С соответственно, величины которых свидетельствуют о том, что g-форма является менее стабильной, чем исходный ?-тромбин. В противоположность этому диизопропилфосфорил-?-тромбин (ДИФ-?-тромбин) обнаруживает два пика температурного перехода (57,5 и 64,5 °С). Данные кругового дихроизма показали, что превращение ?-тромбина в ?-форму слабо влияет на характер спектров КД и вторичную структуру препаратов фермента. Исследование ингибиторного эффекта таких полианионов, как АТР и декстран­сульфат (DS), на процесс свертывания фибриногена тромбином свидетельствует о том, что увеличение отрицательного заряда молекулы обусловливает рост ее ингибиторной активности. Найдено, что в присутствии каталитически неактивного ДИФ-?-тромбина, который содержит интактный анионсвязывающий центр (exosite 1), ингибиторная активность декстрансульфата (DS) в отношении ?-тромбина уменьшается, что объясняется способностью DS взаимодействовать с анионсвязывающим центром как ?-тромбина, так и ДИФ-?-тромбина. В то же время ДИФ-?-тромбин – препарат с нарушенным анионсвязывающим центром – не влияет на ингибиторную активность декстрансульфата, так как в этом случае DS не способен связываться с ДИФ-?-тромбином.
В результате проведенных исследований показано, что молекула тромбина состоит из двух достаточно сильно взаимодействующих доменов, а анионсвязывающий дополнительный центр фермента (exosite 1) может играть первостепенную роль при взаимодействии тромбина с таким полианионом как декстрансульфат.

Ключевые слова: тромбин, ингибиторы тромбина, ?-форма тромбина, вторичная структура, дифференциальная сканирующая микрокалориметрия, круговой дихроизм.

Оригинал статьи на русском языке доступен для скачивания в формате PDF.

© Украинский биохимический журнал