Aрхив журнала > 2005 > №1 январь-февраль
Кінетичний аналіз дії оборотних ефекторів (інгібіторів та активаторів) на ферментативну (транспортну) активність білків
На основании анализа кинетических закономерностей действия обратимых эффекторов (ингибиторов и активаторов) на каталитическую (транспортную) активность белков предложен метод расчета важнейших параметров двухстадийного ферментативного или транспортного процесса – коэффициентов модификации ? и ? (характеризуют механизм действия эффектора), а также констант ингибирования Kі или активации Ka (характеризуют сродство эффектора к белку). В основе метода лежит титрование ферментативного (транспортного) белка субстратом при отсутствии и в присутствии эффектора, взятого в одной из концентраций, а также определение (при фиксированной концентрации субстрата) коэффициента ингибирования i0,5 (в случае действия ингибитора) или коэффициента активации а0,5 (в случае действия активатора). Практическое использование метода продемонстрировано на примере обратимого ингибирования эозином Y (2?,4?5?7?-тетрабромофлуоресцеином) реакции ферментативного гидролиза АТР, катализируемой высокоочищенной транспортной Ca2+, Mg2+-АТР-азой, выделенной из сарколеммы гладкой мышцы. В этом случае ингибиторный эффект характеризуется такими параметрами: ? = 6–8 больше 1; ?= 0,50–0,53 меньше 1; константа ингибирования Kі = 10-9–10-8 М. Следовательно, судя по значениям ? и ? в основе действия эозина Y на анализируемую Ca2+, Mg2+-зависимую АТР-гидролазную ферментативную реакцию лежит механизм смешанного ингибирования (имеет место торможение обеих стадий ферментативного превращения – связывания субстрата с ферментом и распада “комплекса Михаэлиса” в направлении образования продуктов реакции), а сам ингибитор, в соответствии со значением Ki, характеризуется весьма высоким сродством к Ca2+, Mg2+-АТР-азе. Предполагается, что предложенный подход может быть полезен при идентификации типа действия обратимого эффектора на ферментативную (транспортную) активность белков, оценке реального сродства ингибиторов и активаторов к ним.
Получено: 2004-11-12
Опубликовано на сайте: 2005-02-02
Оригинал статьи на украинском языке доступен для скачивания в формате PDF.