Aрхив журнала > 2005 > №1 январь-февраль

Кінетичний аналіз дії оборотних ефекторів (інгібіторів та активаторів) на ферментативну (транспортну) активність білків

C. А. Костерин,  Ю. И. Прилуцкий, П. О. Бориско, Н. С. Мирошниченко

На основании анализа кинетических закономерностей действия обратимых эффекторов (ингибиторов и активаторов) на каталитическую (транспортную) активность белков предложен метод расчета важнейших параметров двухстадийного ферментативного или транспортного процесса – коэффициентов модификации ? и ? (характеризуют механизм действия эффектора), а также констант ингибирования Kі или активации Ka (характеризуют сродство эффектора к белку). В основе метода лежит титрование ферментативного (транспортного) белка субстратом при отсутствии и в присутствии эффектора, взятого в одной из концентраций, а также определение (при фиксированной концентрации субстрата) коэффициента ингибирования i0,5 (в случае действия ингибитора) или коэффициента активации а0,5 (в случае действия активатора). Практическое использование метода продемонстрировано на примере обратимого ингибирования эозином Y (2?,4?5?7?-тетрабромофлуоресцеином) реакции ферментативного гидролиза АТР, катализируемой высокоочищенной транспортной Ca2+, Mg2+-АТР-азой, выделенной из сарколеммы гладкой мышцы. В этом случае ингибиторный эффект характеризуется такими параметрами: ? = 6–8 больше 1; ?= 0,50–0,53 меньше 1; константа ингибирования Kі = 10-9–10-8 М. Следовательно, судя по значениям ? и ? в основе действия эозина Y на анализируемую Ca2+, Mg2+-зависимую АТР-гидролазную ферментативную реакцию лежит механизм смешанного ингибирования (имеет место торможение обеих стадий ферментативного превращения – связывания субстрата с ферментом и распада “комплекса Михаэлиса” в направлении образования продуктов реакции), а сам ингибитор, в соответствии со значением Ki, характеризуется весьма высоким сродством к Ca2+, Mg2+-АТР-азе. Предполагается, что предложенный подход может быть полезен при идентификации типа действия обратимого эффектора на ферментативную (транспортную) активность белков, оценке реального сродства ингибиторов и активаторов к ним.

Получено: 2004-11-12

Опубликовано на сайте: 2005-02-02